丹参酮ⅡA注射液对严重脓毒症大鼠肠黏膜紧密连接蛋白的影响

目的 观察丹参酮ⅡA对严重脓毒症大鼠肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白的影响.方法 将75只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、模型组以及丹参酮ⅡA注射液高(20 mg/kg)、中(10 mg/kg)、低(5 mg/kg)剂量组,每组15只.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型,Sham组仅行开关腹手术而不进行CLP.丹参酮ⅡA注射液组于制模后10 min和6 h腹腔注射不同剂量丹参酮ⅡA;Sham组、模型组于相同时间腹腔注射等体积生理盐水.全部大鼠于术后尾静脉注射生理盐水3 L/kg进行液体复苏.术后12 h处死大鼠,取腹腔淋巴结、肝脏、脾脏、肾脏组织,进行细菌培养并计算细菌移位率;光镜下观察回肠黏膜组织病理学改变并行Chiu评分;采用原位末端缺刻标记试验(TUNEL)检测回肠黏膜上皮细胞凋亡情况,并计算细胞凋亡指数(AI);采用荧光免疫法和蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测回肠组织紧密连接蛋白表面黏附分子(JAM)、闭合蛋白-1(Claudin-1)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、Occludin和炎症蛋白c-Fos、类胰蛋白酶(Tryptase)的含量和蛋白表达水平.结果 ① 腹腔淋巴结、肝脏、脾脏、肾脏组织细菌培养以肠系膜淋巴结阳性率最高,其次为肝脏和脾脏;主要为大肠杆菌、奇异变形杆菌等.模型组细菌培养阳性率最高为38.8%,其次为丹参酮ⅡA注射液低剂量组(35.0%),以丹参酮ⅡA注射液高剂量组最低为16.6%,各组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05).② 病理学观察显示,模型组大鼠回肠黏膜病理改变明显,Chiu评分(分:4.17±0.98比0)和AI(11.70±2.87比2.17±0.80)均较Sham组显著增高(均P<0.05);随丹参酮ⅡA注射液剂量增加,大鼠回肠黏膜病理改变改善程度逐渐增加,Chiu评分和AI均逐渐降低,以丹参酮ⅡA注射液高剂量组的降低程度较模型组更显著〔Chiu评分(分):1.12±0.79比4.17±0.98,AI:3.65±1.98比11.70±2.87,均P<0.05〕.③ 免疫荧光染色显示:蛋白JAM、ZO-1、c-Fos阳性显色均为绿色,Claudin-1、Occludin、Tryptase阳性显色均为红色,均定位在胞质,JAM、Claudin-1、ZO-1、Occludin表达由强到弱依次为Sham组和丹参酮ⅡA高、中、低剂量组以及模型组,c-Fos、Tryptase由强到弱依次为模型组和丹参酮ⅡA低、中、高剂量组以及Sham组.④ Western Blot显示:模型组回肠组织JAM、Claudin-1、ZO-1、Occludin蛋白表达均较Sham组明显降低,而c-Fos、Tryptase蛋白表达均较Sham组明显升高,随丹参酮ⅡA注射液剂量的增加,JAM、Claudin-1、ZO-1、Occludin表达逐渐升高,c-Fos、Tryptase蛋白表达逐渐降低,以丹参酮ⅡA注射液高剂量组变化较低、中剂量更显著〔JAM(灰度值):25.39±1.82比12.41±1.34、19.45±1.66,Claudin-1(灰度值):28.44±1.56比17.26±1.46、21.23±1.34,ZO-1(灰度值):28.84±1.59比16.45±1.21、24.22±1.46,Occludin(灰度值):25.49±1.63比13.34±1.45、19.45±1.37,c-Fos(灰度值):15.76±1.36比27.84±1.36、21.22±1.73,Tryptase (灰度值):14.44±1.41比28.14±1.38、22.32±1.57〕,各剂量组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 丹参酮ⅡA注射液可能通过改善脓毒症模型大鼠肠黏膜上皮紧密连接蛋白而维护肠壁结构、减少细菌移位,且这一作用与丹参酮ⅡA的剂量呈正相关.