c-kit突变型人胃肠间质瘤永生化细胞系的建立与鉴定

目的：通过在c-kit突变型人胃肠间质瘤原代细胞中过表达人端粒酶逆转录酶（ hTERT），建立c-kit突变型人胃肠间质瘤永生化细胞系。方法利用聚合酶链反应（ PCR）技术获得hTERT目的基因片段，测序正确后，体外构建端粒酶亚单位（ hTERT）逆转录病毒表达载体，转染c-kit突变型胃肠间质瘤原代细胞，通过RT-PCR及western bloth技术检测hTERT在原代细胞内的表达变化，选取hTERT表达升高的细胞，利用有限稀释法获得高表达hTERT的单克隆细胞株。结果实验中成功获得hTERT目的基因片段，获得的细胞株与原代细胞相比hTERT表达上调，且体外传代50次后依然保持很好的细胞形态及活力。结论成功获得c-kit突变型人胃肠间质瘤永生化细胞系，为进一步研究c-kit突变对胃肠间质瘤的影响奠定基础。