组蛋白在脓毒症相关细胞因子分泌 及细胞毒效应中的作用研究

目的 探讨组蛋白在脓毒症相关细胞因子释放中的作用,研究组蛋白细胞毒效应及可能作用途径.方法 用不同浓度组蛋白H4(Histone H4,hH4)刺激人单核细胞(THP-1)并与加入IgG及TLR-4抗体干预组对比,测定不同时间点细胞上清液中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10的浓度;在含组蛋白的培养基中加入抗Toll样受体4(toll-like receptor,TLR-4)抗体后孵育THP-1及人血管内皮细胞(human microvascular endothelial cell,HMEC),通过细胞上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平及流式细胞检测评估细胞损伤凋亡程度.结果 ①低浓度组蛋白处理组IL-1β水平与对照组采用student's t检验方法比较,P>0.05,无统计学差异;IL-10及TNF-α水平不同程度升高,中、高浓度蛋白处理组前述各细胞因子浓度均升高,抗TLR-4抗体干预组炎症因子水平较对照组及IgG干预组下降,P<0.01,差异显著.②经含高浓度组蛋白的混合培养基孵育24 h后,THP-1及HMEC组清液中LDH含量采用Mann-Whitney u检验方法比较,均较标准培养基组升高,P<0.05,有统计学意义.流式细胞计数显示凋亡细胞比例上升.加入IgG组上清液LDH含量变化无统计学意义;加入TLR-4抗体组上清液LDH水平与凋亡细胞的比例均显著降低.③对于THP-1细胞,与仅含组蛋白的对照组比较,加入TLR-4抗体的实验组凋亡细胞比例与细胞因子水平均显著下降,且凋亡细胞比例的变化率(-63.77％)较细胞因子变化率(36.14％至45.18％)高.结论 ①组蛋白H4在离体环境下可刺激THP-1细胞分泌多种细胞因子;②组蛋白H4对THP-1和HMEC均表现出细胞毒性效应;③上述两种效应均可被TLR-4抗体拮抗,TLR-4可能为胞外组蛋白参与脓毒症发病的途径之一;TLR-4抗体可能主要通过拮抗组蛋白的细胞毒效应发挥抗炎作用.