新生树鼩心肌细胞与心肌成纤维细胞的分离培养、纯化及鉴定

目的 研究应用树鼩建立人类心血管病理、毒理细胞模型的纯度较高、活力较强的心肌细胞和心肌成纤维细胞的方法.方法 使用差速贴壁1.5 h纯化心肌细胞进行培养,并比较5-溴-2-脱氧尿苷、阿糖胞苷及TGF-β抑制剂的纯化效率以获取最适纯化方案,培养过程在37℃、5％CO2条件下进行.使用MTT法测定细胞活力以确定方法可行性.利用α-横纹肌肌钙蛋白(α-SA)及心肌肌钙蛋白Ⅰ(TnⅠ)对树鼩心肌细胞进行免疫组化及免疫荧光鉴定,利用波性蛋白(Vimentin)对树鼩心肌成纤维细胞进行免疫荧光染色以达到鉴定目的.结果 原代培养新生树鼩心肌细胞生长良好.在倒置显微镜下观察,培养10 d左右的心肌细胞可以基本完成局部融合并伴有细胞搏动.MTT法检测结果显示,心肌细胞活力可以在最少15d内保持良好水平.细胞鉴定结果显示,树鼩心肌细胞α-SA免疫组化呈阳性,Tn Ⅰ免疫荧光鉴定呈阳性,心肌成纤维细胞呈阴性,符合一般心肌细胞特征;心肌成纤维Vimentin免疫荧光结果呈阳性.结论 分离纯化得到的树鼩心肌细胞和心肌成纤维细胞纯度较高、结构完整并具有相对较高的细胞活力,是一种较为理想的、可以应用于树鼩建立人类心血管病理、毒理细胞模型的心肌细胞和心肌成纤维细胞.