TRIM34分子B细胞抗原表位的生物信息学筛选及抗体制备

通过生物信息学软件预测TRIM34蛋白的B细胞抗原表位,制备兔源性抗TRIM34多肽抗体并验证其特异性.首先运用Vector NTI 11.5和Lasergene7.1软件,分析TRIM34蛋白的氨基酸序列,筛选出B细胞抗原表位序列.人工合成TRIM34多肽抗原,并在多肽氨基端与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联.免疫新西兰大白兔,制备抗TRIM34多肽抗体.通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测抗TRIM34多肽抗体的效价,并通过蛋白印迹法和激光共聚焦法检测抗体对TRIM34蛋白的特异性识别能力.经ELISA检测,抗TRIM34多肽抗体的效价为1∶8000.经蛋白印迹检测,抗TRIM34多肽抗体能特异性识别外源性和内源性TRIM34蛋白,同时该抗TRIM34多肽抗体不能识别TRIM34旁系同源分子TRIM6、TRIM5和TRIM22.经间接免疫荧光染色并通过激光共聚焦检测,发现抗TRIM34多肽抗体可以用来显示TRIM34蛋白的亚细胞定位情况.本研究利用生物信息学分析,筛选并合成TRIM34蛋白抗原多肽,成功制备特异识别TRIM34蛋白的兔源多肽抗体.