白藜芦醇对H2O2处理的佐剂性关节炎大鼠软骨细胞增生的影响及与自噬的关系

目的 探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对H2O2处理的佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠软骨细胞增生的影响及其与自噬的关系.方法 采取弗氏完全佐剂注射SD大鼠左侧足趾皮下制作AA动物模型.第15天时,动物处死,取股动脉血,检测AA大鼠氧化应激状态.酶消化法体外培养和鉴定AA大鼠原代软骨细胞,给予低浓度H2O2(5μmol/L)处理原代软骨细胞,模拟体内氧化应激状态.给予不同浓度Res处理,MTT法检测软骨细胞增生活性,激光共聚焦检测软骨细胞中自噬相关基因5(Atg5)的表达,Western blot法检测软骨细胞中p62、Beclin-1自噬相关蛋白的表达.结果 组织染色结果显示:AA大鼠踝关节滑膜组织增生,滑膜中炎细胞明显浸润,软骨膜的连续性被破坏,排列紊乱.AA模型中血清丙二醛含量(11.65±1.06)μmol/L增加,谷胱甘肽过氧化物酶含量(140.18±8.65)μmol/L、超氧化物歧化酶活性(133.72±8.36) U/mL均显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05).细胞组织化学染色示原代软骨细胞胞质Ⅱ型胶原表达阳性.不同浓度Res(1、3、5、10、20、40、80、160 mg/L)可抑制H2O2处理的软骨细胞增生,抑制率分别为(2.2±0.4)％、(5.3±0.6)％、(12.1±1.3)％、(26.6±2.4)％、(40.3±3.1)％、(52.7±4.2)％、(69.2±4.5)％、(72.5±5.1)％,呈剂量依赖性(P＜0.05);半数致死量值为37.2 mg/L.软骨细胞质中Atg5绿色荧光呈剂量依赖性增加;软骨细胞中p62蛋白表达呈剂量依赖性降低,Beclin-1蛋白表达呈剂量依赖性升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Res可抑制氧化应激状态下AA大鼠软骨细胞增生,其作用机制可能与Res诱导的软骨细胞自噬改变有关.