5-氟尿嘧啶对结肠癌干细胞干性和增殖的影响及相关机制

目的 探讨5-氟尿嘧啶(5-FU)抑制结肠癌干细胞(CCSCs)干性对结肠癌细胞生长的影响及相关分子机制.方法 将慢病毒介导的p53特异性短发来RNA(shRNA)转导入CCSCs,构建敲低p53表达的shRNA-p53-CCSCs细胞系.然后将正常CCSCs和shRNA-p53-CCSCs分别分成以下处理组:阴性对照组、DMSO组、舒林酸组和5-FU组,舒林酸组细胞经10μg/ml舒林酸处理,5-FU组细胞经2.5μg/ml 5-FU处理,然后通过BrdU检测试剂盒检测正常CCSCs和shRNA-p53-CCSCs活性,末端转移酶dUTP切口末端标记检测细胞凋亡情况,球体形成实验检测细胞干性变化,Western印迹检测处理后细胞中线粒体凋亡途径相关蛋白Bax/Bcl-2和细胞色素c,β-连环蛋白及其下游靶蛋白c-Myc和cyclinD1表达情况.结果 与阴性对照组相比,5-FU组正常CCSCs增殖速率下降了52％,凋亡率为31％(P<0.05),而shRNA-p53-CCSCs增殖速率下降了73％,凋亡率为42％(P<0.05),舒林酸组正常CCSCs增殖速率下降了47％(P<0.05).球体形成实验检测结果表明,5-FU和舒林酸均显著抑制CCSCs球体形成,且与阴性对照组相比,5-FU和舒林酸组球体体积显著下降(P<0.05),5-FU处理后正常CCSCs中Bax/Bcl-2比例升高约4倍,正常CCSCs与shRNA-p53-CCSCs中细胞色素c表达分别升高约2.8倍,2.5倍,β-连环蛋白在正常CCSCs的胞质和胞核中分别下降75％,73％,在shRNA-p53-CCSCs中分别下降81％,80％,而c-Myc和cyclinD1在上述两种细胞中的表达分别下降83％,52％和47％,53％.结论 5-FU能通过抑制Wnt/β-连环蛋白信号通路并上调线粒体介导的细胞凋亡抑制CCSCs增殖并促进细胞凋亡,具有潜在的抗肿瘤性.