乙酰紫草素对HCV复制的影响及其作用机制研究

目的 探讨乙酰紫草素对HCV复制的影响及其作用机制.方法 (1)体外培养Huh7细胞,用不同浓度乙酰紫草素溶液与Huh7细胞进行共同培养,采用MTS法检测细胞的相对活力,观察乙酰紫草素对Huh7细胞的毒性作用.(2)采用JFH-1毒株感染Huh7细胞后,用不同浓度(0、0.1、0.2、0.4、0.8 μM)的乙酰紫草素溶液进行处理,检测HCV RNA以及HCV core蛋白的表达水平,观察乙酰紫草素对Huh7细胞中HCV JFH-1复制的影响.(3)取JFH-1感染的Huh7细胞分为HCV组和HCV+乙酰紫草素组,HCV+乙酰紫草素组用0.8 μM乙酰紫草素处理,HCV组不处理;取未感染JFH-1的Huh7细胞,分为乙酰紫草素组和对照组,乙酰紫草素组用0.8 μM乙酰紫草素处理,对照组不处理.通过检测LC3 mRNA以及LC3B蛋白的表达水平,观察乙酰紫草素对细胞自噬标志因子LC3表达的影响.结果 (1)乙酰紫草素浓度在1.0 μM或更低时对Huh7细胞生长影响很小或没有影响,在2.50 μM以上时表现出明显的细胞毒性作用.(2)不同浓度乙酰紫草素(0.1、0.2、0.4、0.8 μM)处理组细胞内HCV RNA水平均显著低于未用乙酰紫草素处理组,差异有统计学意义(P＜0.05),HCV core蛋白的表达量均显著低于未用乙酰紫草素处理组.(3)在基因水平上,LC3 mRNA的表达水平表现为HCV组＞对照组＞HCV+乙酰紫草素组＞乙酰紫草素组,差异有统计学意义(P＜0.05);在蛋白水平上,LC3B蛋白的表达水平表现为HCV组＞对照组＞ HCV+乙酰紫草素组＞乙酰紫草素组.结论 乙酰紫草素可以抑制HCV复制,同时下调自噬标志因子LC3的表达,可通过调节细胞自噬途径影响HCV病毒的复制.