筛选小鼠Cltb启动子顺式元件结合蛋白的酵母单杂交文库的构建

目的 利用酵母单杂交系统筛选与Cltb基因启动子结合的顺式元件,获得调控Cltb基因表达的转录因子,阐明Cltb基因的转录调控机理.方法 首先,构建表达Cltb调控序列的诱饵质粒pBait-AbAi,并将诱饵质粒转入Y1 HGold菌株,构建可稳定表达“诱饵-报告子”的酵母菌株;然后,运用SMARTTM技术构建小鼠肺组织酵母单杂交cDNA AD融合表达文库,并进行cDNA文库的筛选.结果 成功构建了筛选Cltb启动子顺式元件结合蛋白的酵母单杂交文库,该文库的转化效率为:9.35×105CFU/μg.通过对文库的筛选最后获得了5个阳性克隆并测序,得到5个可编码结合蛋白的基因,分别是Srrt、hnRNPs A/B 、Irf1、NKx2.5和Zfp953.结论 所构建的酵母单杂交文库符合实验要求,筛选的5个转录因子为研究Cltb基因表达调控奠定了基础.