交叉引物恒温扩增技术检测创伤弧菌的应用研究

目的 建立一种快速检测创伤弧菌(Vibrio vulni ficus)的交叉引物恒温扩增(cross priming amplification,CPA)技术.方法 针对创伤弧菌vvhA基因序列保守区域设计CPA引物和探针,并优化反应体系和反应条件,同时验证方法的灵敏度和特异性.结果 对创伤弧菌的检测具有高度特异性;对创伤弧菌菌液检测的灵敏度达到了1.28×103 CFU/mL,此法40～60 min内即可完成检测.利用CPA法针对本实验室前期研究的CB型、EA型、CAB型、CA型和EB型等亚型创伤弧菌毒株计算特异性和敏感性,5种亚型中除了CB亚型特异性和敏感性为95.65％和100％,其余亚型特异性和敏感性均为100％.结论 本研究建立的CPA法具有较高的特异性和灵敏性,可有效缩短检验时间提高检验效率.