采用分子筛层析法分离纯化细粒棘球蚴囊液粗抗原

目的 分离纯化细粒棘球蚴囊液抗原,去除其中的非特异性反应蛋白,探索优化囊液抗原制备方法. 方法 采用超滤法浓缩羊肝细粒棘球蚴囊液制备成粗抗原,并采用免疫印迹实验对囊液抗原进行分析,发现非特异性反应的主要蛋白条带.随后采用Superdex凝胶柱通过分子筛层析法对囊液抗原进行纯化.用44份细粒棘球蚴病患者、17份健康人和10份囊尾蚴患者血清进行酶联免疫实验,评估纯化后囊液抗原的检测能力. 结果 免疫印迹实验发现,非特异性反应的主要条带的相对分子质量(Mr)约为55 000,纯化后去除了该非特异性反应蛋白.纯化后的囊液抗原ELISA检测灵敏度为93.2％ (41/44),特异性为94.1％ (16/17),约登指数为0.87,与囊尾蚴病交叉反应性为30％(3/10).未纯化前的灵敏度为90.9％ (40/44),特异性为88.2％ (15/17),约登指数0.79,与囊尾蚴病交叉反应性为60％ (6/10).纯化前后ELISA检测的灵敏度存在显著性差异. 结论 本研究采用分子筛层析法对羊源细粒棘球蚴的囊液抗原进行纯化,去除了引起非特异性反应的主要蛋白(Mr 55 000),为后续进行囊液抗原标准化、提高检测能力提供了依据.