不同浓度白藜芦醇对破骨细胞分化的影响及自噬的作用

目的 研究不同浓度白藜芦醇(RSV)对破骨细胞分化的影响及自噬在其中的作用.方法 RANKL诱导RAW264.7细胞分化过程中,加入不同浓度(0、0.1、0.5、1、5及10 μmol/L)RSV,CCK-8检测干预后12、24、48、72 h时的细胞活力;TRAP染色观察破骨细胞分化程度.加或不加入3-甲基嘌呤(3-MA)抑制自噬,RT-PCR检测破骨分化相关标志物TRAP、MMP-9、CTSK和自噬相关标志物LC3、Beclin-1、P62的mRNA表达情况;Western blot检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、P62的表达情况.结果 RANKL诱导分化过程中,细胞增殖活力提高,加入0.1～10 μmol/L的RSV,细胞活力先上升后下降,在0.5μmol/L时达到最大;0.1 μmol/L和0.5μmol/L的RSV能提高TRAP染色阳性的破骨细胞数和TRAP、MMP-9、CTSK、LC3、Beclin-1、P62的mRNA表达,自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1也增加,P62的蛋白表达则减少;而1～10 μmol/L RSV随浓度升高相关mRNA及蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1的表达减少,P62的蛋白表达增加;加入3-MA后,相关mRNA及蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1的表达减少,P62的蛋白表达增加.结论 RSV浓度在0.1～10 μmol/L范围内,破骨细胞分化和自噬水平先升高后降低,抑制自噬可以抑制破骨细胞的分化.白藜芦醇影响破骨细胞分化可能部分是通过调节自噬发挥作用.