沉默Notch-1基因影响人膀胱癌RT4细胞生物学行为的体外实验研究

目的:研究沉默Notch-1基因对人膀胱癌RT4细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化等生物学行为的影响.方法:设计并构建Notch-1 shRNA,选取RT4细胞作为研究对象分别进行转染.实验细胞分为Notch-1阴性对照组(shRNA NC),Notch-1干扰组(Notch-1 shRNA).细胞转染48 h后,MTT法检测细胞增殖水平变化;Transwell检测细胞侵袭力的改变;流式细胞术检测细胞凋亡水平情况;RT-PCR和Western blot检测凋亡相关蛋白(Bax、Bid、Bcl-2)及上皮间充质转化(EMT)因子(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)在mRNA和蛋白水平上的改变.结果:与shRNA NC组相比,Notch-1 shRNA组细胞增殖率明显下降(t=4.629,P=0.010),侵袭力减弱(t=8.193,P=0.001),细胞凋亡率明显升高(t=–18.441,P<0.001),Bad(t=–12.521,P<0.001;t=–6.983,P=0.002)、Bid(t=–9.231,P<0.001;t=–8.871,P=0.001)、E-cadherin(t=–13.457,P<0.001;t=–5.610,P=0.005)mRNA和蛋白表达量增多,Bcl2(t=10.651,P<0.001;t=6.973,P=0.002)、N-cadherin(t=6.505,P<0.001;t=10.132,P=0.001)、Vimentin(t=9.135,P<0.001;t=5.630,P=0.005)mRNA和蛋白表达量显著降低.结论:沉默Notch-1的表达能够抑制人膀胱癌RT4细胞的增殖和侵袭迁移,促进其细胞凋亡,其机制可能与诱导Bad、Bid、E-cadherin,抑制Bcl2、N-cadherin、Vimentin的表达有关.