COMMD7基因活化 PI3K/AKT 信号通路促进 HepG2细胞增殖转移的分子机制研究

目的：探索肝癌相关基因 COMMD7促进 HepG2细胞增殖转移的分子机制。方法设计针对 COMMD7基因的特异性 siRNA（small interference RNA）转染人类肝癌细胞株 HepG2，作为干扰组（Si-HepG2）；并设置 PTEN 抑制剂处理组（Si ＋BpV-HepG2）；空白对照组（HepG2）；空载体对照组（N-HepG2）。qRT-PCR 检测转染后各组 COMMD7、PTEN 基因 mRNA 的表达变化；Western blot 检测各组 COMMD7、PTEN、p-AKT 和 AKT 蛋白的表达变化；MSP 法检测 PTEN 基因甲基化水平；CCK8法检测细胞增殖能力；Transwell 实验检测细胞在转染前后转移及侵袭能力的改变。结果siRNA-COMMD7转染 HepG2细胞后，qRT-PCR 检测结果显示，与空白对照组及空载体对照组相比较干扰组 COMMD7基因的表达量降低89．9％，PTEN 基因的表达量升高2．841倍，差异均有统计学意义（P ＜0．05）；Western blot 检测结果显示，siRNA 干扰组 COMMD7表达明显降低，PTEN 表达升高；下游 p-AKT 表达受到显著抑制；PTEN 抑制剂处理组 PTEN 表达受到显著抑制，下游 p-AKT 的表达明显增强；MSP 法检测结果显示，干扰组与空白对照组及空载体对照组比较，PTEN 发生明显的去甲基化，表明抑制 COMMD7表达可诱导 PTEN 去甲基化。CKK8实验结果显示，干扰组细胞较空白对照组、空载体对照组和 PTEN 抑制剂处理组增殖速度明显降低，差异均有统计学意义（P ＜0．05）；Transwell 实验实验结果显示，干扰组穿膜细胞数（17．4±2．7），较空载体对照组（36．2±3．2）、空白对照组（41．6±4．5）及 PTEN 抑制剂处理组（47．6±1．8）明显减少，差异均有统计学意义（P ＜0．05）。结论siRNA 干扰下调 COMMD7基因的表达，可诱导 HepG2细胞内抑癌基因 PTEN 的去甲基化，增加 PTEN 蛋白的表达而抑制 PI3K／AKT 信号通路，以降低 HepG2细胞的增殖、迁移及侵袭能力。