NOD2调控Snail表达在糖尿病肾病足细胞上皮-间质转分化中的作用

目的 观察高糖环境中足细胞核苷酸结合寡聚化结构域蛋白2(NOD2)、上皮-间质转分化(EMT)相关蛋白的表达,探讨NOD2参与EMT的分子机制.方法 常规方法培养人肾小球足细胞,高糖刺激后细胞免疫荧光法检测EMT相关蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、nephrin的表达;实时荧光定量PCR和Western印迹法检测NOD2、锌指转录因子(Snail)和足细胞EMT相关蛋白α-SMA、结蛋白(Desmin)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)及Nephrin的表达.shRNA干扰NOD2表达后再给予高糖刺激细胞,Western印迹法检测Snail及后续EMT相关蛋白的表达情况.用shRNA干扰Snail表达后,胞壁酰二肽(MDP)活化NOD2,Western印迹法检测E-cadherin、Nephrin、Desmin、α-SMA的表达.结果 高糖刺激24 h后,与正常对照组相比,高糖组NOD2、Snail mRNA和蛋白的表达明显增加;上皮表型蛋白E-cadherin、Nephrin mRNA和蛋白的表达下调,间质表型蛋白Desmin、α-SMA mRNA和蛋白的表达上调(均P＜0.05);高渗对照组无明显变化.干扰NOD2表达后,Snail及EMT相关蛋白表达异常均得到恢复,与高糖组相比差异有统计学意义(均P＜ 0.05).与MDP组相比,MDP+shRNA-Snail组细胞E-cadherin、Nephrin蛋白的表达明显增加;Desmin、α-SMA表达明显减少(均P＜0.05).结论 高糖可诱导足细胞NOD2表达,并通过上调Snail表达促进足细胞上皮-间质转分化.以NOD2/Snail/EMT通路为靶点的基因干预可减轻高糖引起的足细胞损伤,可能为糖尿病肾病的治疗提供新思路.