miR-155、miR-15a和miR-181c在糖尿病环境下对人阴茎海绵体血管内皮细胞功能的影响

目的：晚期糖基化终产物AGEs联合高糖（AGE-BSA+高糖）刺激人阴茎海绵体血管内皮细胞（HCECs）诱导糖尿病环境，观察其对内皮功能相关的miR-155、miR-15a和miR-181c及其靶基因的表达变化影响。方法利用人阴茎海绵体分离鉴定的HCECs，随机分为两组：正常+BSA组（NC组）、AGE-BSA+高糖（DM组）。采用蛋白印迹实验检测RAGE蛋白表达确定诱导体外糖尿病环境；采用实时定量PCR来检测miR-155、miR-15a和miR-181c及对应靶基因eNOS、TXNIP、VEGFA、IRS1和KLF6的mRNA表达变化；采用蛋白印迹实验验证靶基因的蛋白表达变化。结果与NC组相比，DM组在AGE-BSA+高糖刺激下，RAGE基因的mRNA水平和蛋白水平均明显升高；同时观察到miR-155表达明显升高而miR-15a和miR-181c的表达明显降低。miR-155对应的靶基因eNOS的mRNA水平和蛋白水平明显降低；miR-15a对应的靶基因TXNIP的mRNA水平和蛋白水平明显升高，靶基因IRS1的mRNA水平明显升高但蛋白水平变化不明显，靶基因VEGFA的mRNA水平没有显著变化；miR-181c对应的靶基因KLF6的mRNA水平和蛋白表达水平明显升高，而靶基因IRS1的mRNA水平明显升高但蛋白水平变化不明显。结论 HCECs在AGE-BSA+高糖刺激的糖尿病环境下，miR-155、miR-15a和miR-181c均有显著的表达差异，并负调控它们对应的靶基因eNOS、TXNIP及KLF6发生不同程度的表达变化。结果提示糖尿病环境下的HCECs中多种miRNAs可能参与了糖尿病内皮功能障碍的发生发展过程，其具体的机制有待进一步深入研究。