Wnt通路激活的结直肠癌细胞抑制肿瘤浸润性树突细胞成熟的机制研究

目的 大部分肠癌存在Wnt通路激活,基础研究发现Wnt通路可影响肿瘤免疫,但其在结肠癌中的作用不明.本研究主要探讨Wnt通路激活对结肠癌免疫微环境的影响以期发现结直肠癌免疫治疗新靶点.方法 免疫荧光技术验证SW480和NCM460 Wnt通路状态;qPCR和Western blot技术对比Wnt通路激活的结肠癌细胞系SW480和正常肠上皮细胞NCM460 IL-1β表达水平的不同;分离人外周血单核细胞,用集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4联合诱导形成未成熟树突细胞(iDC),再加入IL-1β刺激诱导成熟树突细胞(mDC),用流式细胞技术检测mDC细胞表面成熟分子表达量.结果 SW480细胞核表达beta-catenin,提示Wnt通路激活.使用Wnt通路抑制剂(ICG-001)处理SW480后IL-1βmRNA和蛋白表达水平均升高,且随浓度升高而升高,使用wnt通路激活剂(Licl)处理NCM460后IL-1βmRNA和蛋白表达水平均低于对照组,且随浓度升高而降低,且IL-1β蛋白表达量均与非磷酸化β-连环蛋白(activeβ-catenin)表达量呈负相关关系.IL-1β可促进iDC成熟,IL-1β50 ng/mL组HLA-DR、CD86表达率分别为(69±3.62)％、(84.3±4.7)％,与RPMI组及TNF-a 10 ng/mL组相比,表达显著上调(P<0.001).结论 Wnt通路激活的结直肠癌可能通过减少IL-1β的表达来阻碍肿瘤微环境中DC的成熟.