悬浮搅拌法培养和扩增诱导多能干细胞

目的 建立一种新的搅拌培养法,大量培养、快速扩增诱导多能干细胞(iPSCs).方法 采用搅拌式细胞培养器悬浮培养iPSCs,每4d为1个周期,第4天检测细胞聚集球的直径；经8次传代后,计算细胞倍增时间和细胞数量,经实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测多能性标志物Oct4、Nanog和性别决定区Y框蛋白2(SOX2) mRNA表达,免疫荧光法检测Oct4蛋白表达,组织染色法检测碱性磷酸酶(ALP)活性.结果 搅拌式培养iPSCs,细胞倍增时间为(20.82±1.27)h；培养1d后,细胞形成微小聚集球,经1个周期4d的培养,细胞球直径达到最大(184.1±7.2)μm,经传代8次,可以扩增到起始细胞数量的1014倍；Real-time PCR和免疫组织化学结果显示这些iPSCs仍然高表达多能性标记.结论 这种新方法能够快速、大量扩增iPSCs,并且这样培养的iPSCs能够保持其多能性.