RNA干扰下调Ezrin表达对乳腺癌细胞体外侵袭和迁移能力的影响

我们通过RNA干扰使Ezrin基因沉默并观察其对乳腺癌细胞MCF-7恶性表型的影响. 一、材料与方法 1.材料:胎牛血清、DMEM、Trizol试剂、细胞株MCF-7,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测试剂盒、PCR产物回收试剂盒,质粒pSIREN-DNR-DsRed-Express,BamH Ⅰ、Sal Ⅰ、EcoR Ⅰ、T4连接酶、Ezrin抗体和β-肌动蛋白(β-actin)抗体等,胶回收试剂盒. 2.实验方法:人乳腺癌细胞MCF-7于含10％胎牛血清的DMEM培养基中培养.设计合成发夹状小干扰RNA(shRNA)结构,转染细胞.PCR检测Ezrin mRNA水平,Western blot检测蛋白表达水平;Boyden小室体外侵袭实验检测细胞侵袭能力;划痕愈合实验检测细胞迁移能力[1].