激活素A调节人卵巢颗粒细胞Smad2和CYP19A表达的研究

目的 探讨激活素A通过Smad2和CYP19A表达促进颗粒细胞增殖的作用途径.方法 2017年3～8月,在宁夏医科大学总医院生殖医学中心就诊的患者中,选取体外受精-胚胎移植(IVF-ET)或卵胞质内单精子注射(ICSI)两种助孕方式治疗的15例患者为研究对象.取分离纯化的卵巢颗粒细胞,经原代培养48 h后分组:激活素A组添加50μg/ml的激活素A,Bimagrumab组添加5μM选择性ActRⅡ抑制剂Bimagrumab,混合组同时添加50μg/ml的激活素A与20μM的Bimagrumab,再继续培养24 h.采用Western印迹法检测蛋白表达水平,逆转录及实时PCR检测mRNA表达水平,细胞免疫荧光化学检测蛋白定位.采用单因素方差分析、t检验进行统计学分析.结果 激活素A组中ActRⅡ、p-Smad2/Smad2蛋白表达水平均高于空白对照组,Bimagrumab组中ActRⅡ和p-Smad2/Smad2蛋白表达水平低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05),提示Bimagrumab对ActRⅡ有抑制效果,激活素A对ActRⅡ有促进效果.混合组中CYP19A1蛋白表达低于空白对照组,激活素A组中CYP19A1蛋白表达水平高于空白对照组;差异有统计学意义(P<0.05).激活素A组中Smad2和CYP19A1 mRNA表达水平高于空白对照组,混合组中Smad2和CYP19A1 mRNA表达水平低于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).细胞免疫化学染色显示,Smad2和CYP19A1存在于卵巢颗粒细胞中,Smad2阳性染色定位于细胞胞浆,CYP19A1阳性染色定位于细胞胞浆和细胞膜.结论 颗粒细胞分泌因子激活素A激活Act RⅡ信号通路,增加p-Smad2/Smad2和CYP19A1的表达水平,进一步促进颗粒细胞增殖和分化.