正常官颈宫颈上皮内瘤变与宫颈鳞癌组织的差异表达蛋白分析

目的 探讨采用比较蛋白质组学方法筛查正常宫颈、官颈上皮内瘤变(CIN)和官颈鳞癌(SCC)组织中的差异表达蛋白,为研究CIN发展为SCC的分子机制及临床诊治工作提供依据.方法 收集正常宫颈组织(因子宫肌瘤行全子宫切除术)9例、CIN组织23例(其中CIN Ⅰ级7例、CINⅡ级8例、CINⅢ级8例)和SCC组织7例.应用二维荧光差异凝胶电泳和DeCyder软件寻找差异表达蛋白质点,基质辅助激光解析电离-飞行时间串联质谱仪鉴定差异蛋白质点,数据库搜索差异表达蛋白.收集正常官颈组织20例、CIN组织60例和SCC组织20例,应用免疫组化法和Western blot法验证差异最显著的S100蛋白A9(S100A9)、真核翻译延长因子1α1(eEF1 A1)和丙酮酸激酶M2(PKM2)在不同官颈组织中的表达差异.结果 建立了分辨率高、重复性好的正常宫颈、CIN与SCC的双向凝胶电泳图谱.选取显著表达差异蛋白质点46个(其中上调27个,下调19个)进行鉴定,成功鉴定出26个蛋白质.免疫组化法检测结果显示,S100A9蛋白主要表达于细胞质,其在正常宫颈组织、CIN组织和SCC组织中的阳性表达率分别为20.0％、70.0％和100.0％,差异有统计学意义(P=0.006).eEF1A1蛋白主要表达于细胞质,其在正常宫颈组织、CIN组织和SCC组织中的阳性表达率分别为70.0％、73.3％和60.0％,差异无统计学意义(P =0.758).PKM2蛋白主要表达于细胞核,其在正常宫颈组织、CIN组织和SCC组织中的阳性表达率分别为100.0％、93.3％和75.0％,差异接近有统计学意义(P =0.059).Western blot法检测的结果与免疫组化法检测的结果基本一致.结论 正常官颈、CIN和SCC组织间存在蛋白质表达的差异.S100A9、eEF1 A1和PKM2可能成为官颈癌早期诊断的标志物和治疗的新靶点,并为研究CIN发展为官颈癌的发病机制提供基础.