白藜芦醇调控miR-519c逆转乳腺癌多柔比星耐药作用机制研究

目的 白藜芦醇具有一定抗肿瘤作用,但其对多柔比星耐药细胞株MCF-7/ADR逆转耐药的作用及机制尚不清楚.miR-519c是一种内源性短链非编码小分子核糖核苷酸,在肿瘤细胞耐药过程中具有重要作用.本研究旨在探讨白藜芦醇能否通过调控miR-519c逆转乳腺癌多柔比星耐药.方法 MTS法和克隆形成实验检测并计算白藜芦醇细胞逆转耐药倍数;裸鼠移植瘤实验检测白藜芦醇对MCF-7/ADR细胞体内移植瘤的抑制作用;实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测裸鼠移植瘤中miR-519c表达水平;细胞转染miR-519c抑制剂后,克隆形成实验检测MCF-7/ADR乳腺癌细胞增殖情况;蛋白质印迹法检测ATP结合盒转运蛋白G2(ATP binding cassette transporter G2,ABCG2)和HuR耐药蛋白表达.结果 10μmol/L白藜芦醇逆转MCF-7/ADR细胞对多柔比星的耐药性,多柔比星组和多柔比星+白藜芦醇组IC50值分别为(29.82±1.26)和(10.25±0.86)μmol/L,t=31.42,P<0.001,耐药逆转倍数约为2.9倍;多柔比星组和白藜芦醇组细胞克隆数分别为296±32和281±27,高于白藜芦醇+多柔比星组(81±11),差异有统计学意义,F=69.20,P<0.001;白藜芦醇体内逆转MCF-7/ADR细胞耐药,多柔比星组和白藜芦醇组裸鼠移植瘤组织质量分别为(0.71±0.12)和(0.66±0.23)g,高于白藜芦醇+多柔比星组(0.19±0.08)g,差异有统计学意义,F=6.25,P<0.001;白藜芦醇能够促进miR-519c表达,白藜芦醇组和白藜芦醇+多柔比星组miR-519c相对含量分别为2.913±0.793和3.526±0.827,高于多柔比星组(1.012±0.231),差异有统计学意义,F=10.72,P=0.010;转染miR-519c抑制剂后,多柔比星组和白藜芦醇+多柔比星+miR-519c抑制剂组克隆数分别为296±32和256±29,高于白藜芦醇+多柔比星组(81±9),差异有统计学意义,F=59.25,P<0.001;蛋白印迹结果显示,多柔比星组、白藜芦醇+多柔比星组和白藜芦醇+多柔比星+miR-519c抑制剂组ABCG2蛋白表达量分别为(1.056±0.079)、(0.432±0.051)和(0.895±0.084),F=59.41,P<0.001;HuR蛋白表达量分别为(1.138±0·093)、(0.495±0.073)和(0.937±0.098),F=41.30,P<0.001.多柔比星+白藜芦醇组耐药相关蛋白ABCG2和HuR表达低于多柔比星组,差异具有统计学意义,均P<0.001;多柔比星+白藜芦醇+miR-519c抑制剂组ABCG2和HuR蛋白表达高于多柔比星+白藜芦醇组,差异具有统计学意义,均P<0.001.结论 miR-519c可能参与MCF-7/ADR乳腺癌耐药,白藜芦醇可能通过升高MCF-7/ADR细胞中miR-519c水平,抑制细胞耐药蛋白表达,发挥逆转耐药作用.