乙醛脱氢酶1A1基因真核表达载体的构建与鉴定

目的：构建人乙醛脱氢酶1A1（ ALDH1A1）真核表达载体，并鉴定其生物学功能。方法通过基因克隆技术获得人ALDH1A1基因cDNA序列；测序正确后，将其连接到真核细胞表达载体pEGFP?N1，构建pEGFP?N1?ALDH1A1表达载体，经酶切鉴定、测序正确后，用脂质体转染技术将pEGFP?N1?ALDH1A1表达载体转染人胃癌细胞株MKN?28细胞，利用免疫印迹法鉴定表达产物，紫外?可见分光光度法测定ALDH1A1活性的改变。结果成功克隆到人ALDH1A1基因的全长cDNA，经测序与GeneBank序列完全一致；成功构建pEGFP?N1?ALDH1A1表达载体，经Western blotting鉴定显示ALDH1A1在MKN?28细胞中过表达，活性检测证实转染组的ALDH1A1活性较对照组明显升高。结论成功构建并鉴定了ALDH1A1基因过表达的胃癌细胞模型，为下一步研究ALDH1A1在胃癌中作用机制打下了基础。