PEA-15真核表达载体的构建及表达

目的 构建PEA-15真核表达载体pcDNA3.1-PEA-15,并在人类食管癌细胞(EC-109)中表达.探讨PEA-15对EC-109细胞的影响.方法 采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测EC-109细胞中的PEA-15基因表达.构建重组真核表达载体pcDNA3.1-PEA-15.酶切及测序鉴定重组质粒正确后,脂质体介导转染至EC-109细胞中.采用RT-PCR、Western blot法检测基因及蛋白表达.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长抑制率.结果 RT-PCR显示PEA-15在EC-109细胞中表达.PCR扩增片段与预期片段大小相符,测序结果表明真核表达载体pcDNA3.1-PEA-15构建成功.转染后的细胞中PEA-15表达均增加(t值分别为4.078、5.269,均P＜0.05).转染质粒72h后,细胞的生长抑制率较转染空质粒组降低[(7.12±0.86)％、(12.55±1.78)％,t=6.163,P＜0.05].结论 成功构建重组真核表达载体pcDN A3.1-PEA-15,并在EC-109细胞中进行了表达;转染后对食管癌细胞生长有促进作用,其表达可能促进食管癌的发生.