稳定沉默动粒蛋白-H表达的人乳腺癌细胞株的构建

目的 构建人动粒蛋白-H(CENP-H) shRNA反转录病毒表达载体,获得稳定转染的人乳腺癌细胞株.方法 合成CENP-H基因干扰序列,定向插入反转录病毒表达载体pSUPE-Rretro-puro质粒并测序鉴定;干扰质粒经磷酸钙介导转染293FT细胞制备反转录病毒;对人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435细胞进行反转录病毒感染,嘌呤霉素筛选获得稳定转染的细胞株.Real-time PCR和Western blot分别检测稳定转染细胞株的CENP-H mRNA和蛋白的表达.结果 成功构建和筛选出靶向CENP-H基因的两对shRNA质粒表达载体.稳定转染细胞CENP-H mRNA表达显著下调,CENP-H的蛋白表达水平明显低于对照.结论 稳定沉默CENP-H表达的人乳腺癌细胞株的建立,为以CENP-H基因为靶点的人乳腺癌基因研究提供了实验基础.