尼妥珠单抗对肺癌A549细胞系的体外放射增敏效应

目的：研究尼妥珠单抗对肺腺癌A549细胞系的放射增敏作用及潜在的分子机制。方法体外培养人肺腺癌A549细胞系，克隆形成实验测定尼妥珠单抗和辐射联合作用于A549细胞系的细胞存活率，并根据数学模型拟合细胞存活曲线，求出放射增敏比（ SER ）。其次，采用流式细胞术检测尼妥珠单抗联合2 Gy、8 GyX线照射后的细胞周期变化。最后，Western blot 检测尼妥珠单抗与放射联合作用后细胞EGFR磷酸化水平的差异，再检测A549细胞接受辐射后p27、AKT及其磷酸化形式在不同时间点的表达情况，与单纯放射组比较表达的差异。结果克隆形成实验显示尼妥珠单抗显著增加了A549细胞的放射敏感性，放射增敏比（ SER）为1．36。尼妥珠单抗使细胞周期阻滞于G1／S期，而辐射后细胞周期阻滞于G2／M期，二者联合作用后S期比例较单纯放射组细胞显著减少。尼妥珠单抗与放射联合作用后，辐射诱导的EGFR磷酸化被抑制，AKT在放射后各时间点Thr308位点磷酸化也受到显著抑制，p27蛋白在放射后各时间点表达水平均显著下降，而尼妥珠单抗作用后p27表达明显增加，再行照射后仍有较高表达。结论尼妥珠单抗对体外培养的肺腺癌细胞系具有放射增敏作用，其机制在于通过对EGFR功能的抑制，抑制了其下游信号通路中AKT的激活，而p27的表达增加，可能与细胞周期分布发生改变相关。