转化生长因子β2对人眼Tenon囊成纤维细胞中赖氨酰氧化酶家族表达的诱导作用

背景 研究表明,转化生长因子β2(TGF-β2)促进Tenon囊成纤维细胞(TFs)的活化,在青光眼滤过术后结膜下纤维化过程中发挥作用,但其作用机制尚未完全明了.赖氨酰氧化酶家族(LOXs)与细胞外基质重塑有关,了解青光眼术后滤过泡的纤维化过程中TGF-β2与LOXs活化的关系对青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化的防治具有重要意义. 目的 观察TGF-β2对体外培养的人眼TFs中LOXs蛋白表达变化的影响.方法 将培养的第4～8代人TFs分为正常对照组和不同质量浓度TGF-β2培养组,分别在细胞培养液中添加终质量浓度为2、4、8和16 ng/ml TGF-β2继续培养24 h,采用Western blot法测定不同质量浓度TGF-β2培养组细胞中LOXs蛋白表达的变化,确定最适TGF-β2刺激质量浓度.用4 ng/ml TGF-β2分别处理培养的TFs 6、12、24和48 h,采用Western blot法测定各时间点细胞中LOXs蛋白表达的变化.采用细胞免疫荧光法分别检测正常对照组和4 ng/ml TGF-β2培养组TFs中LOX蛋白的表达及其在细胞中的分布. 结果 Western blot 法检测显示,正常对照组及2、4、8和16 ng/ml TGF-β2培养组人TFs中LOX、LOXL1、LOXL2、LOXL3及LOXL4蛋白的表达强度均随TGF-β2质量浓度的升高而增加,各组间细胞中LOX、LOXL1、LOXL2、LOXL3和LOXL4蛋白相对表达量的总体比较,差异均有统计学意义(F=37.338、13.438、31.067、11.767、15.167,均P＜0.01),细胞中LOX、LOXL1、LOXL2、LOXL3及LOXL4蛋白相对表达量的升高呈TGF-β2剂量依赖性.正常对照组及4 ng/ml TGF-β2刺激人TFs后6、12、24和48 h组,细胞中LOXL2蛋白的相对表达量分别为0.68±0.07、1.09±0.10、1.32±0.07、1.50±0.06和1.89±0.12,其表达强度呈时间依赖性,总体比较差异有统计学意义(F=82.832,P=0.000).正常对照组人TFs中LOX蛋白表达强度较弱,主要位于细胞质中,TGF-β2培养组细胞中LOX蛋白的表达强度明显强于正常对照组,且表达LOX蛋白的细胞增多. 结论 正常人TFs中可见LOXs呈低表达,TGF-β2以剂量和时间依赖的方式上调人TFs中LOXs蛋白的表达.这个结果为青光眼术后滤过泡纤维化的相关防治研究提供了实验依据.