藤壶cp19k基因mRNA二级结构对其在大肠杆菌中表达的影响

目的 探究藤壶cp19k基因5'端mRNA二级结构对其在大肠杆菌中表达的影响.方法 通过对3个藤壶物种的cp19k基因(balcp19k、mrcp19k、bicp19k)序列进行分析,并利用大肠杆菌密码子偏好性对其进行优化,将优化后的3个基因序列利用BioSun软件分析其5'端和3'端的mRNA二级结构和自由能.利用大肠杆菌原核表达系统对3个基因进行表达,并通过SDS-PAGE观察蛋白表达情况.结果 3个基因的3'端mRNA二级结构和自由能差异较小;5'端mRNA二级结构相比,balcp19k结构相对简单,自由能较高,mrcp19k和bicp19k二级结构较稳定,自由能较低.SDS-PAGE及Western印迹结果显示,Balcp19k蛋白有表达,而Mrcp19k蛋白和Bicp19k蛋白无表达.结论 cp19k基因5'端mRNA二级结构稳定且自由能低不利于蛋白表达.此结果为藤壶cp19k的进一步研究奠定了基础,也为其他外源基因在原核系统中表达提供了借鉴.