双孔钾离子通道TREK-1功能性串联二聚体载体的构建

目的：探讨在双孔钾离子通道（K2P）TREK-1（TWIK related K ＋ channel 1）分子间加入柔性 linker 构建串联二聚体载体的可行性。方法利用 PCR 技术在两个单体 TREK-1分子之间加入一个 linker，构建串联二聚体载体（pGH19-tdTREK-1）。将上述载体体外转录成 cRNA 并显微注射至爪蟾卵母细胞，培养24～48 h 后采用双电极电压钳技术记录电流。观察胞外钡离子和不同 pH 值外液对该串联二聚体通道表达的影响，并与天然二聚体通道的反应相比较。结果串联二聚体 TdTREK-1可在爪蟾卵母细胞中高效表达，该通道形成的电流可被胞外钡离子抑制，也可被胞外液酸化所抑制，而该串联二聚体通道对这些胞外刺激因素的反应程度与天然二聚体相似。结论人为加入柔性 linker 序列构建串联二聚体 TREK-1通道并不影响通道的表达及门控特性，证明该实验方案可行。这将为操作单个亚基，进而深入研究 TREK-1的结构与功能打下良好的基础。