携带AFP启动子凋亡诱导配体基因的间充质干细胞与5-FU联用对HepG2细胞移植瘤的抑制作用

利用人脐带组织来源的MSCs (Human umbilical cord-derived MSCs,HUMSCs)运载AFP启动子驱动的凋亡诱导基因ILZ-sTRAIL,并与化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用,探讨其对HepG2肝癌原位移植瘤的抑制作用.以克隆载体pUp-AFP、报告基因载体pGL3-basic及慢病毒表达载体pLentiR.ILZ-sTRAlL、pLen-tiR.CopGFP为基础,采用PCR、酶切、连接的方法构建AFP启动子特异性驱动TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)表达的载体pLentiR.AFPILZ-sTRAIL及其对照载体pLentiR.AFPCopGFP.利用双荧光素酶法检测HepG2、MCF-7和3T3细胞中AFP启动子的特异性活性;利用慢病毒感染的方法将HUMSCs标记AFP启动子驱动的Luc(MSC.AFPILZ-sTRAIL),建立Balb/c裸鼠的HepG2肝癌原位移植瘤模型.应用MSC.AFPILZ-sTRAIL与5-FU联合进行治疗,利用Western blot检测ILZ-sTRAIL蛋白于肿瘤部位的表达,并于治疗后对肝脏中的肿瘤进行测量,同时眼眶取血检测血浆中谷氨酸转氨酶(ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的表达水平.结果 表明,成功构建了报告基因载体pGL3-AFP、慢病毒表达载体pLentiR.AFPILZ-sTRAIL及pLentiR.AFPCopGFP,测序正确.AFP启动子在HepG2细胞中的相对活性为49.05％ ±5.47％,由AFP启动子调控表达ILZ-sTRAIL基因的慢病毒可有效的感染HUMSCs.成功建立了Balb/c裸鼠的HepG2肝癌原位移植瘤模型,ILZ-sTRAIL蛋白能特异的表达于肿瘤部位.MSC.AFPILZ-sTRAIL+ 5-FU组的肿瘤体积明显小于PBS组(P＜0.01),并且效果强于MSC.AFPILZ-sTRAIL单独治疗组;MSC.AFPILZ-sTRAIL+ 5-FU组可见肿瘤细胞固缩、坏死,并有不同程度的淋巴细胞浸润.MSC.AFPILZ-sTRAIL+ 5-FU组裸鼠血浆中ALT和AST的表达水平较对照组显著下降,其中ALT下降的更为明显(ALT,P＜0.01;AST,P＜0.05).这一调控性治疗模式与5-FU联合应用在肝癌原位治疗中取得了良好的治疗效果,为肝癌的基因治疗和临床化疗提供了新思路.