促血小板生成素模拟肽二联体连接肽的筛选

比较不同Linker连接的促血小板生成素模拟肽二联体(dTMP)的生物活性,筛选高生物活性dTMP的Linker设计.全基因合成4个dTMP基因,将片段克隆到pGEX-4T-1载体,构建重组表达载体pGEX-4T-1/dT-MP,筛选阳性目的克隆,转化大肠杆菌BL21(DE3),0.1 mmol/L IPTG诱导表达融合蛋白.超声细胞破碎仪破菌,Glutathione Sepharose 4 Fast Flow亲和层析获得GST-dTMP融合蛋白,凝血酶酶切,再次亲和层析除去GST标签,收集目的dTMP肽片段,双荧光素酶法检测各目的肽片段的活性.通过实验,正确构建了4个不同的pGEX-4T-1/dTMP表达载体,经表达纯化得到了GST-dTMP融合蛋白,酶切后再次亲和层析纯化,并获得了相对分子质量与理论值3 920,3 640,3 610,3 430相符的4个dTMP肽片段,它们的活性大小依次为:dTMP-Linker3＞ dTMP-Linker4＞dTMP-Linker1＞dTMP-Linker2.实验发现,不同的连接肽显著影响dTMP肽片段的生物活性,该实验成功筛选到了活性较高的连接肽Linker3.