金黄色葡萄球菌蛋白A突变体的表达纯化与亲和色谱填料的制备
Chinese Journal of Pharmaceuticals（2019）
摘要
对本实验室构建表达金黄色葡萄球菌蛋白A突变体的工程菌E.coli BL21 (DE3)/pET28a-SPlSPA进行高密度发酵和重组蛋白的表达.发酵液经2步色谱纯化后获得纯度98.48％的蛋白A突变体.对其与环氧预活化琼脂糖的键合反应条件进行优化,确定最佳参数为:反应体系中每克基质加入50 mg蛋白A突变体至终浓度16 mg/ml,在pH 8.5条件下反应18h.性能测定结果表明抗体结合时间为6 min时,自制填料的动态结合载量为75 mg/ml填料;抗体纯化回收率为85％;使用0.1 mol/L氢氧化钠溶液在位清洗20轮(每轮5次运行)后,填料动态结合载量保持在初始载量的97％以上.
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