轮状病毒Rotateq及Rotarix疫苗VP8*蛋白的原核表达、纯化与鉴定

目的:通过大肠埃希菌原核表达体系,分别获得轮状病毒疫苗Rotateq及Rotarix的VP8*基因表达产物,为深入研究轮状病毒VP8*蛋白的结构和功能奠定基础.方法:基因合成轮状病毒疫苗Rotateq及Rotarix的P[8]型VP8*基因序列,将其克隆到携带有GST标签的pGEX-4T1表达载体中构建重组质粒pGEX-4T1-VP8*,测序正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),通过SDS-PAGE电泳检测表达产物,并通过Glutathione Sepharose 4B纯化柱进行纯化,Western Blot鉴定.结果:SDS-PAGE电泳结果显示分子量52KD处有深染带,Western-Blot显示该处蛋白能与GST标签抗体结合.结论:成功构建了包含Rotateq及Rotarix VP8*基因的重组表达载体pGEX-4T1-VP8*,获得了可溶性GST-VP8*重组蛋白.