新生小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离方法

目的 提取新生小鼠的原代肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ),并进行培养和鉴定.方法 应用酶消化和免疫磁珠分选方法分离并纯化C57B/L6新生小鼠AECⅡ.根据AECⅡ特异的细胞形态,利用透射电镜进行鉴定.正置荧光显微镜观察AECⅡ特异性肺泡表面活性蛋白-C前体(proSP-C)及表面活性蛋白-B(SP-B)的表达.免疫印记技术检测新生小鼠AECⅡ中特异性肺泡表面活性蛋白-A(SP-A)及proSP-C的表达.结果 每只新生小鼠可获得(2±0.5)×105AECⅡ,纯度>90％.电镜下可见丰富的AECⅡ及其特异结构板层小体.正置免疫荧光显微镜观测AECⅡ中proSP-C和SP-B蛋白的表达,免疫印迹结果显示细胞内SP-A和proSP-C蛋白表达呈阳性.结论 利用酶消化和免疫磁珠分选的方法可成功分离出高产量、高纯度的新生小鼠AECⅡ.