补肾益髓方及其拆方调控实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠轴突再生抑制信号通路相关分子的实验研究

目的 观察补肾益髓方( Bushen Yisui formula,BSYSF)及其拆方补肾方( Bushen formula,BSF)和化痰活血方( Huatan Huoxue formula,HTHXF)对实验性自身免疫性脑脊髓炎( experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠轴突再生抑制信号通路NogoA/NgR/RhoA/ROCK的调控作用.方法 将雌性C57BL/6 小鼠采用数字表法随机分为正常对照组( normal control, NC)、模型组(model,MO)、醋酸泼尼松组( prednisone acetate, PA,6 mg/kg)、梓醇组( catapol,CA,40 mg/kg)、BSYSF 组(生药3.02 g /kg)、BSF组(生药1.44 g /kg)、HTHXF 组(生药1.57 g /kg),每组16 只.用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55 ( myelin oligodendrocyte glycoprotein35-55 ,MOG35-55 )免疫小鼠制备EAE模型. NC和MO组小鼠灌服蒸馏水,各治疗组予相应药物灌胃,每日1次,共40 d.免疫第25天和40天,分别取小鼠脑和脊髓.应用实时荧光定量-PCR(quantitative real time-PCR,qRT-PCR)检测NogoA、NgR、RhoA和ROCKⅡmRNA表达;免疫组织化学( immunohistochemistry,IHC)和蛋白质印迹( Western blotting, WB)法测定上述指标蛋白的表达.结果 MO组小鼠脑和脊髓NogoA、NgR、RhoA和 ROCKⅡmRNA和蛋白表达较NC组明显上调( P<0.05,P<0.01,P<0.001).经BSYSF及其拆方BSF和HTHXF治疗后,NogoA、NgR、RhoA和ROCKⅡmRNA和蛋白的表达均有不同程度的降低,BSYSF组的上述指标差异有统计学意义(P <0.05,P <0.01,P <0.001).结论 BSYSF 及其拆方 BSF 和HTHXF均具有调节EAE小鼠轴突抑制因子NogoA/NgR及其信号通路RhoA/ROCK作用,并且BSYSF作用明显.上述结果为阐释BSYSF促进轴突再生的作用机制提供了实验依据.