尿多酸肽对原代红系细胞γ-珠蛋白表达的体外研究

目的:探讨尿多酸肽(CDA-Ⅱ)对体外培养原代红系细胞γ-珠蛋白基因和蛋白表达的影响,为CDA-Ⅱ对β-地中海贫血的治疗提供新思路.方法:以不同浓度CDA-Ⅱ(0 mg/mL、1 mg/mL、2 mg/mL、3 mg/mL、4 mg/mL)作用原代红系细胞24h、48 h和72h,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和Cell counting kit-8(CCK-8)法分别检测γ-珠蛋白基因的表达及细胞增殖-毒性情况;以3 mg/mL CDA-Ⅱ为实验组、200 nmol/L地西他滨和100 μmol/L羟基脲为阳性对照组以及等体积PBS+DMSO为阴性对照组作用细胞后,采用RT-PCR检测γ-珠蛋白、DNA甲基转移酶1(DNMT1)和FOXO3a mRNA表达的变化;Western Blot (WB)检测γ-珠蛋白表达的情况.结果:RT-PCR结果表明,3mg/mL CDA-Ⅱ作用细胞48 h和72 h后上调γ-珠蛋白基因的表达作用明显(P＜0.05),分别为空白对照组(0 mg/mL)的2.5倍和2.68倍;CCK-8结果显示细胞存活率存在时间和浓度依赖性下降,24 h、48 h和72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(5.28±0.67) mg/mL、(3.89±0.63)mg/mL、(2.35±0.20)mg/mL;与阴性对照组比较,CDA-Ⅱ组与地西他滨、羟基脲阳性对照组既可以降低DNMT1基因的表达(P＜0.05)、升高FOXO3a基因的表达,同时可以上调γ-珠蛋白基因和蛋白的表达(P＜0.01).结论:CDA-Ⅱ对红系细胞γ-珠蛋白基因和蛋白的高表达可能与DNMT1和FOXO3a有关.