弓形虫表面抗原1、棒状体蛋白18真核表达载体的构建与体外表达

目的：构建刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）表面抗原1（surface antigen 1，SAG1）及棒状体蛋白18（rhoptry protein 18，ROP18）的真核表达重组质粒，并在真核细胞中表达目的蛋白。方法：设计 SAG1、ROP18的特异引物，采用 RCR 技术从弓形虫 RH 株基因组 DNA 中扩增编码 SAG1、ROP18基因片段，经克隆至 pTG19-T 载体后，亚克隆至真核表达载体 p3×FLAG-Myc-CMVTM-24，构建真核表达重组质粒 p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-SAG1和 p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-ROP18。将构建好的真核表达重组质粒转染人肾上皮细胞系293-T 细胞，分析转染细胞的表达情况。结果：PCR 扩增弓形虫 SAG1和 ROP18基因片段分别为1011 bp 和1665 bp，与预期大小相符。重组质粒经 PCR、酶切和测序鉴定结果均正确，通过 RT-PCR 和蛋白质印迹技术鉴定出重组质粒 p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-SAG1和 p3× FLAG-Myc-CMVTM-24-ROP18在293-T 细胞中表达。结论：成功构建了真核表达质粒 p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-SAG1和 p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-ROP18，该重组质粒能够在真核细胞中表达目的蛋白。