人巨细胞病毒PP65抗原单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备人巨细胞病毒(human cytomega1ic virus,HCMV) PP65抗原的单克隆抗体,并通过免疫组化鉴定单克隆抗体与HCMV PP65抗原的反应性.方法 诱导PQE30-PP65重组质粒表达PP65蛋白并Ni柱亲和层析纯化.PP65抗原免疫BALB/c小鼠,将血清抗体阳性小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,经HTS筛选,扩大培养获取单克隆抗体.经Protein A亲和层析纯化,并通过间接ELISA鉴定其特异性、效价及亚型.将制备的单克隆抗体应用于临床样本的玻片免疫组化检测.结果 获得8株高特异性抗HCMV PP65抗原的单克隆抗体,其亚型均为IgG1型,轻链均为κ链,效价均在1∶2 048 000以上.其中6株单克隆抗体能够通过玻片免疫组化法准确鉴定HCMV激活性感染.结论 成功制备了HCMV PP65单克隆抗体.单抗与白细胞中HCMV PP65抗原反应良好.