氧化石墨烯促进HaCaT细胞迁移及初步机制研究

目的 观察氧化石墨烯(grapheneoxide,GO)对人表皮细胞株HaCaT细胞迁移的影响,初步探讨其可能机制.方法 将HaCaT细胞分别应用GO终浓度为0、0.001、0.01、0.1、1.0、10.0 μg/mL的RPMI 1640细胞培养液培养,在培养的不同时相点,应用CCK-8法检测细胞活性,蛋白印迹法检测PCNA表达.采用划痕实验检测细胞迁移情况,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架改变,蛋白质印迹法检测细胞F-actin、Vinculin的表达.结果 (1)低浓度GO对HaCaT细胞增殖无影响,当GO浓度高于1.0 μg/mL时则具有明显的毒性作用.10.0 μg/mL GO可明显抑制细胞PCNA表达(P＜0.05).(2)划痕实验结果显示:低浓度GO可促进HaCaT细胞迁移,其中以0.01 μg/mL浓度效果最明显,在划痕后24 h,该组细胞迁移面积比对照组增加35.33％ (P ＜0.01).(3)激光共聚焦显微镜观察发现,0.01μg/mL GO刺激后,细胞纤毛明显增多,胞内应力性纤维增粗.而其1.0 μg/mL组细胞变小、变圆.(4)蛋白印迹法检测结果显示:0.01μg/mL GO刺激后F-actin表达增加(P＜0.05),而1.0μg/mL作用后F-actin表达却明显低于对照组.GO能促进Vinculin表达,但仅当GO浓度高于0.1 μg/mL后差异才有统计学意义.结论 特定浓度的GO可促进HaCaT细胞迁移,可能与其影响细胞骨架及F-actin、Vinculin表达有关.