玻璃化冻融不同时段rFSH联合rLH干预对小鼠卵巢VEGF及Cx37表达的影响

目的 通过在玻璃化冻存的不同时段给予小鼠卵巢组织重组人卵泡刺激素(recombinant follicle-stimu-lating hormone,rFSH)与重组人黄体生成素(recombinant luteinizing hormone,rLH)共同干预,观察对冻融小鼠卵巢组织的形态学、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及缝隙连接蛋白(connexin-37,Cx37)表达的影响.方法 将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢组织随机分为新鲜对照组(FCG)、玻璃化冻存对照组(VCG)、冻存全程添加rFSH+rLH组(OG-rFSH+rLH)、冻存前添加rFSH+rLH组(BG-rFSH+rLH)以及冻存后添加rFSH+rLH组(AG-rFSH+rLH),干预组浓度均为0.15IU·mL-1 rFSH+0.15IU·mL-1 rLH.通过形态学、 免疫组织化学技术观察并分析各组卵巢组织形态结构及VEGF、Cx37蛋白表达量的改变;通过Real-time PCR技术检测并分析各组VEGF及Cx37 mRNA的表达变化.结果 正常卵泡百分比在VCG组最低,OG-rFSH+rLH组最高(P<0.05),在BG-rFSH+rLH组低于OG-rFSH+rLH组,高于FCG组、VCG组及AG-rFSH+rLH组(P<均0.05);干预组VEGF蛋白表达量由高到低依次为OG-rFSH+rLH组、BG-rFSH+rLH组、AG-rFSH+rLH组,且均高于VCG组(P<0.05);Cx37蛋白表达量及VEGF mRNA表达量均为OG-rFSH+rLH组最高,VCG组最低(P<0.05);Cx37 mRNA表达量在OG-rFSH+rLH组最高,VCG组最低,FCG组高于VCG组,低于BG-rFSH+rLH组和AG-rFSH+rLH组(P均<0.05).结论 玻璃化冻存过程添加rFSH+rLH的干预模式提升卵泡存活率、VEGF、Cx37蛋白及mRNA的表达,最佳干预效果依次为全程干预、冻存前时段干预及冻存后时段干预.