布鲁菌S2株感染巨噬细胞后对小胶质细胞极化的影响

目的 确定布鲁菌S2株感染巨噬细胞后对BV-2小胶质细胞极化的影响.方法 用布鲁菌S2株感染 RAW264.7巨噬细胞24及48h后,收集未感染巨噬细胞的上清液(COU)和感染巨噬细胞24h的上清液(COB24h)及48h的上清液(COB48h),BV-2细胞经上述上清液分别处理24h.实验分为空白对照组、COU组、COB24h组、COB48h组.倒置相差显微镜观察各组细胞形态.RT-qPCR检测iNOS、TNF-α、Arg-1mRNA的表达.ELISA检测培养细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素10(IL-10)的水平.免疫组化染色法观察iNOS蛋白的表达.结果 BV-2细胞经上清处理后,镜下观察COB24h、COB48h处理的BV-2细胞胞体变大,细胞核变大,突起较多,并较空白组伸长明显,呈长杆状.与空白对照组比较,COB24h组与COB48h组BV-2细胞iNOS及TNF-α mRNA的表达升高(P均＜0.01),Arg-1 mRNA的水平降低(P＜0.01),且COB48h组iNOS mRNA表达升高(P＜0.01);COB24h组与COB48h组上清中TNF-α、IL-1β的含量升高(P均＜0.01),COB48h处理组IL-10的含量降低(P＜0.05).免疫组化染色法观察BV-2细胞中iNOS蛋白阳性表达在胞浆中,为橙色颗粒,COB48h组胞浆中iNOS蛋白的表达高于空白对照组.结论 布鲁菌S2株感染巨噬细胞后的上清液可以驱动小胶质细胞向经典激活的巨噬细胞(M1)极化.