肾-骨髓联合移植诱导免疫耐受患者外周血B淋巴细胞重构的动态特点及其意义

目的:探讨外周血B淋巴细胞在肾-骨髓联合移植诱导免疫耐受患者中重构的动态特点,为进一步阐明B淋巴细胞在器官移植免疫耐受建立中发挥的作用提供实验依据.方法:5例尿毒症患者(患者编码分别为Pt.A、Pt.B、Pt.C、Pt.D和Pt.E)应用诱导治疗后行肾-骨髓联合移植,术后免疫抑制剂逐渐撤除.应用流式细胞术检测患者移植术前及术后外周血B淋巴细胞数量及其亚群分布,比较不同时间点B淋巴细胞的动态变化,并利用下一代基因测序技术分析免疫球蛋白重链可变区(IGHV)的分布状态.结果:除1例患者(编码为Pt.C)移植肾早期丧失功能,其他4例患者纳入研究.Pt.A、Pt.B和 Pt.D均在术后1年左右外周血 B细胞计数基本恢复术前水平,Pt.E 外周血 B 淋巴细胞重构延迟.在 B 淋巴细胞重构过程中,伴随有高频度的CD20+CD24highCD38high过渡性B淋巴细胞出现,并表现为多样性的细胞克隆图谱.移植术后约6个月时患者外周血均检测出CD20+CD27+记忆性B淋巴细胞的优势亚群.通过计算术后各时点 IGHV多样性指数发现,所有肾-骨髓联合移植患者术后182 d时点的 IGHV基因序列的香农指数(SDI)明显低于术前(P=0.004),术后1年左右逐渐恢复.不同时点B细胞 IGHV基因序列的体细胞突变检测,除了Pt.B,其他患者 IGHV基因序列的体细胞突变率在术后182 d时点明显升高(P=0.032).结论:肾-骨髓联合移植患者外周血中存在体细胞突变的记忆性B淋巴细胞,此类B细胞亚群在免疫耐受诱导中发挥潜在作用.