乏氧对人口腔鳞状细胞癌细胞中叉头蛋白P3表达的影响及其机制

目的:观察乏氧对人口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞中叉头蛋白P3(FOXP3)表达的影响,阐明乏氧调控FOXP3表达的表观遗传学机制.方法:选取人OSCC细胞株FaDu和OECM-1细胞,常氧和乏氧条件下培养18 h.采用实时定量PCR方法检测细胞中FOXP3 mRNA的相对表达水平,Western blotting 法检测FaDu和OECM-1细胞中FoxP3蛋白表达水平,染色质免疫沉淀-定量PCR(ChIP-qPCR)法检测FOXP3基因启动子上组蛋白修饰H3K4乙酰化(H3K4ac)、H3K4三甲基化(H3K4me3)和H3K27三甲基化(H3K27me3)水平.采用组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)基因沉默的FaDu细胞,以实时定量PCR和ChIP-qPCR法检测FaDu细胞中HDA3 mRNA相对表达水平和FOXP3 mTNA表达抑制率.结果:与常氧条件比较,乏氧条件下FaDu和OECM-1细胞中FOXP3 mRNA相对表达水平均明显降低,分别下降65.6%(P<0.01)和75.7%(P<0.01);Western blotting检测,乏氧条件下FaDu和OECM-1细胞中FOXP3蛋白表达水平明显低于常氧条件下;染色质免疫沉淀实验,与常氧条件比较,乏氧条件下FaDu细胞中FOXP3基因启动子上的H3K4ac和H3K4me3水平明显降低(P<0.01),而H3K27me3水平无明显差异.与无HDAC3基因沉默的FaDu细胞比较,HDAC3基因沉默的FaDu细胞中缺氧诱导的FOXP3启动子上H3K4ac和H3K4me3表达抑制率明显降低(P<0.05),缺氧诱导的FOXP3 mRNA相对表达抑制率降低(P<0.05).结论:乏氧可通过HDAC3介导的FOXP3基因启动子上H3K4ac水平下调而抑制OSCC细胞中FOXP3的表达.