流式细胞仪MoFlo Astrios EQ96孔板单细胞分选方法的条件优化

目的·优化流式细胞仪MoFlo Astrios EQ 96孔板单细胞分选方法,为单细胞技术的应用奠定基础.方法·通过对仪器精确调节及各项参数优化,采用不同孔径喷嘴、不同分选方式对32D、U937、iBMDM和293T共4种细胞进行单细胞分选,观察分选后单细胞孔数以及单细胞所形成克隆孔数.结果·在单细胞分选模式下,70、100 μm喷嘴分选获得单细胞的孔数分别为83～91、87～93孔.分选后的单细胞经7～10d培养后,70μm喷嘴分选获得的单细胞所形成克隆的孔数为36～58孔;100 μm喷嘴条件下电荷式分选、“无电”直接分选获得的单细胞所形成克隆的孔数分别为53～78、69～81孔.结论·进行单细胞分选时,选择100 μm喷嘴和“无电”直接分选方式可得到较好的细胞活性与较高的细胞克隆率.