人源骨架蛋白FN3展示脑钠肽前体N端抗原表位研究

目的·应用人源骨架蛋白FN3展示脑钠肽前体N端(NT-proBNP)抗原表位,采用大肠杆菌表达系统高效表达具有脑钠肽前体N端抗原表位活性的结构稳定的重组蛋白.方法·将编码脑钠肽前体N端第12 ～ 21位和第13 ～ 20位氨基酸残基的抗原表位序列分别取代骨架蛋白FN3 FG loop区,并克隆到大肠杆菌表达载体pET28(a)+上,由大肠杆菌BL21 (DE3) plySs表达后纯化,检测其抗原活性并进行理化性质分析.结果·成功构建骨架蛋白FN3展示脑钠肽前体第12 ～ 21位和第13 ～ 20位氨基酸残基抗原表位的表达载体,获得高效表达骨架蛋白FN3展示脑钠肽前体N端抗原表位的大肠杆菌表达菌株.镍柱纯化后获得高纯度重组蛋白,经Western blotting与ELISA鉴定具有脑钠肽前体N端抗原免疫活性.通过差式热量扫描法检测显示重组蛋白保持FN3骨架蛋白原有结构稳定性;血浆稳定性检测显示重组蛋白是与抗原蛋白等效的高稳定的抗原蛋白替代物,可明显延长降解周期(血浆半衰期).结论·成功利用了FN3骨架蛋白展示脑钠肽N端前体,采用大肠杆菌表达系统可以简单、快速、高效制备具有与脑钠肽前体的抗原性相当的脑钠肽前体抗原替代物.