FMU100抗体的超高效液相色谱法定量检测方法的建立

目的 建立UPLC-protein A定量检测FMU100单克隆抗体的方法.方法 使用Waters UPLC超高效液相色谱仪,Applied Biosystem的PA ImmunoDetection Sensor Cartridge(2.1×30 mm,20μm)色谱柱,柱温30℃,检测波长280 nm,进样体积10μL,以流动相A(10 mmol/L PBS含0.15 mmol/L NaCl,pH 7.2)-流动相B(0.15 mmol/L NaCl,pH 2.6)进行梯度洗脱,流速0.5 mL/min.结果 在0.034~2.200 mg/mL浓度,线性相关系数r2为0.9999,浓度与峰面积间呈良好的线性关系;检测限为0.01 mg/mL,定量限为0.07 mg/mL;回收率为98.18%~99.16%;重复性RSD为0.1%~1.9%;在8 h内,每个2 h测定发酵液中抗体的含量,FM U100抗体峰面积RSD为1.8%;在流动相A pH变化±0.2、流动相B NaCl比例变化±5%、柱温变化±5℃ 、检测波长变化±5 nm、流速相对值变化±20%时,FM U100抗体峰峰面积RSD为1.7%(n=12);检测方法符合系统适应性要求.