自噬对125I-anti-TLR5同种移植排斥靶向显像的影响

目的 探讨自噬对放射性碘125标记抗Toll样受体5(125I-anti-TLR5)靶向同种移植排斥显像的影响及特点.方法 建立小鼠皮肤同种移植模型,分为对照组(无药物处理)、雷帕霉素组、3-甲基腺嘌呤(3MA)组和联合组(雷帕霉素+ 3MA处理).采用Iodogen法常规制备125I-anti-TLR5,测定其在生理盐水和血清中的稳定性;体外根据浓度不同将细胞分为对照组、雷帕霉素组(10 ng/mL)、3MA组(10 mmol/L)和联合组(10 ng/mL雷帕霉素+10 mmol/L3 MA),研究125I-anti-TLR5与处理细胞的结合与解离;在移植后9d,在小鼠同种皮肤移植模型尾静脉注射125I-anti-TLR5,72 h后进行生物学分布研究,24、48、72 h进行全身磷屏自显影显像,分析T/NT比值(靶与非靶比值);采用病理及免疫组化染色法分析移植皮片Beclin1/TLR5的表达.结果 125I-anti-TLR5标记率高,稳定性好.与雷帕霉素组相比,联合组细胞与125 I-anti-TLR5结合率与解离率无明显改变.注射125I-anti-TLR5后72 h,标记物主要经肝肾代谢.移植皮片放射性浓聚,雷帕霉素组和联合组T/NT比值显著高于对照组(P ＜0.001,P＜0.001).全身动态磷屏放射自显影显像显示,各组48 h移植皮片即可显像,其中雷帕霉素组移植皮片放射性浓聚最明显(P＜0.001);雷帕霉素组和联合组72 h显像明显,放射性活度比均显著高于对照组(P＜0.001).移植后12d对照组移植皮片炎症细胞浸润明显,而雷帕霉素组与联合组炎性浸润减少;对照组及雷帕霉素组自噬分子Beclin1表达增高,而联合组无明显降低;雷帕霉素组及联合组TLR5表达无显著变化.结论 自噬抑制对雷帕霉素作用下TLR5表达及125I-anti-TLR5靶向同种移植排斥显像无明显影响,125I-anti-TLR5可用于免疫耐受状态下同种移植排斥显像.