人血管生成素1基因慢病毒表达载体的构建及其在脐带间充质干细胞的表达

目的：通过基因重组技术构建人血管生成素-1（Ang-1）基因慢病毒表达载体，并检测其在人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）的表达及对 hUC-MSCs 免疫抑制能力的影响。方法应用 Trizol 法从 hUC-MSCs 提取总RNA，反转录获取cDNA，PCR扩增获得编码Ang-1的序列克隆到GV287载体中。将重组GV287-Ang-1载体质粒和慢病毒包装质粒pHelper 1．0和pHelper 2．0共转染293T细胞，收集病毒上清，纯化浓缩测定病毒滴度。采用荧光显微镜观察转染效率，Western blotting法检测Ang-1蛋白表达，并通过CCK8试剂盒检测T淋巴细胞增殖活性。结果 Ang-1基因扩增PCR产物与预期大小一致。重组慢病毒GV287-Ang-1质粒经PCR和DNA测序分析显示，所得结果与目的基因序列一致且插入方向正确。包装慢病毒浓缩悬液滴度为2×108 TU／mL，最佳感染复数为8。GV287-Ang-1转染组细胞Ang-1表达显著高于未转染组和GV287转染组。过表达Ang-1的hUC-MSCs对T淋巴细胞的增殖抑制显著高于单纯的hUC-MSCs。结论成功构建携带Ang-1基因的慢病毒载体GV287-Ang-1，并可有效转染hUC-MSCs过表达Ang-1蛋白，且能显著提高hUC-MSCs的免疫抑制能力。