3-MA对缺氧/复氧心肌细胞自噬及凋亡的影响

目的:使用3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)抑制自噬后对缺氧/复氧心肌细胞凋亡及相关凋亡蛋白及自噬蛋白表达的影响.方法:取48只出生24 h内的C57BL/6J乳鼠,随机分成3组:正常对照组(C)、缺氧/复氧组(H/R)、3-MA联和缺氧/复氧组(3-MA+H/R),每组16只.使用胰蛋白酶联合Ⅱ型胶原蛋白酶分离心肌细胞,培养7 d后,正常组继续培养,H/R组更换无血清、无糖DMEM培养基,在低氧培养箱(37℃,1％O2,5％CO2,94％N2)3 h,更换完全培养基放入正常培养箱(37℃,21％O2,5％CO2)6 h.3-MA+H/R组在缺氧/复氧前3 h加入3-MA使其终浓度为10 mM,其后处理同H/R组.测定培养基中乳酸脱氢酶(LDH)含量、流式细胞仪测定细胞凋亡,以及western-blot检测凋亡相关蛋Bcl-2、Cyt c、以及自噬相关蛋白Beclin-1蛋白的表达.结果:(1)H/R组、3-MA+H/R组心肌细胞培养液LDH含量及细胞凋亡率显著增加,较正常对照组心肌细胞具有明显差异(P<0.01),3-MA+H/R组LDH含量及细胞凋亡率较H/R组明显增加,具有统计学意义(P<0.01).(2)与正常对照组相比,H/R组、3-MA+H/R组Bcl-2、Beclin-1蛋白降低(P<0.01),Cyt c蛋白表达升高(P<0.01),3-MA+H/R组中Bcl-2、Beclin-1蛋白表达较H/R组表达明显减少(P<0.001),Cyt c蛋白表达显著升高,差异显著(P<0.01).结论:抑制自噬会加重缺氧/复氧心肌细胞损伤,降低Bcl-2、Beclin-1表达,增加Cyt c表达,促进心肌细胞凋亡.适当地提高缺氧/复氧心肌细胞的自噬水平可能会对心肌细胞起到保护作用.