HoxB8对结直肠癌细胞生长迁移的影响

目的:通过构建过表达HoxB8基因的慢病毒表达载体,研究HoxB8基因对结直肠癌细胞生长迁移的影响.方法:采用PCR技术扩增出人HoxB8基因全长,通过限制性内切酶EcoR Ⅰ和SACⅡ双酶切,T4 DNA连接酶连接,克隆至慢病毒载体,构建Lenti-HoxB8-GFP重组载体.重组阳性克隆进行PCR和酶切鉴定,测序验证序列正确.将重组载体质粒以及3个辅助质粒共转染人肾上皮细胞(293T)进行慢病毒包装,收集病毒颗粒.然后将病毒颗粒感染结直肠癌细胞RKO,并将RKO细胞分为转染组(转染慢病毒重组质粒Lenti-HoxB8-GFP)、对照组(转染空白质粒Lenti-GFP)和空白对照组.RT-PCR和Western blot法检测病毒感染后HoxB8在细胞中的表达情况.MTT、平板克隆形成实验和Transwell小孔试验检测过表达HoxB8基因对结直肠癌细胞生长迁移的影响.结果:经鉴定显示重组载体质粒构建成功,测序正确.293T细胞高效包装Lenti-HoxB8-GFP慢病毒,携带HoxB8基因的慢病毒感染RKO细胞后可看到大量绿色荧光,RT-PCR和Western blot法检测分别证实HoxB8基因和蛋白在转染组细胞中呈高表达.实验组细胞的增殖和平板克隆形成能力高于空白组及对照组.Transwell小孔试验结果显示HoxB8高表达能够促进结直肠癌细胞的转移.结论:成功构建HoxB8慢病毒表达载体,过表达HoxB8能够促进结直肠癌细胞的增殖、克隆形成以及迁移.